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RNA提取試劑盒在實驗前也是有準備工作的

更新時間:2022-05-28點擊次數(shù):1153
 
  RNA提取試劑盒用于從細胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無色水相和粉紅色有機相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強、提取量高、專一性強,應(yīng)用范圍廣。
  RNA提取試劑盒使用方法:將0.5mL結(jié)合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中,放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結(jié)合液,轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中,顛倒混勻數(shù)次,離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個離心管中。用0.5mL結(jié)合液,混勻后4℃200g離心5分鐘,小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次,用RNase-free水洗脫mRNA,用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。
  RNA提取試劑盒實驗前的準備:
  1、預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:
 ?、偈褂脽oRNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。
  ②玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。
 ?、叟渲迫芤簯?yīng)使用無RNase的水。
  ④操作人員戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。
  2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
  3、使用前若發(fā)現(xiàn)TRIzonReagent有沉淀,可置于56℃水浴幾分鐘,即可溶解。
  4、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽說明在BufferRW2中加入無水乙醇。
  5、所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進行,且所有操作步驟動作要迅速。
  6、若下游實驗對DNA非常敏感,建議用不含RNase的DNaseI(貨號:WE0213S)對RNA進行處理。
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