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蛋白Marker的分類

在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白Marker的作用就像是參照標(biāo)尺，用于目標(biāo)蛋白分子量大小的確定、蛋白分離成功與否的判斷等。因此，選擇合適的蛋白Marker，對實(shí)驗(yàn)來說至關(guān)重要，那你知道蛋白Marker的分類是如何劃分的嗎？讓我們一起來看看吧！一、非預(yù)染蛋白Marker非預(yù)染蛋白Marker是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液，方便不同大小的蛋白比較。其條帶在結(jié)合染料時(shí)，分子量不會(huì)改變，可準(zhǔn)確評估SDS-PAGE的蛋白樣品分子量。非預(yù)染蛋白Marker在電泳過程中看不到，...

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細(xì)胞復(fù)蘇的小Tips

一、細(xì)胞復(fù)蘇的原理細(xì)胞復(fù)蘇的原理是基于將細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復(fù)活力的技術(shù)。遵循“快融”原則，短時(shí)間內(nèi)融化胞外結(jié)晶，避免緩慢融化導(dǎo)致水分滲入胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶損傷細(xì)胞，融化越快，細(xì)胞損傷越小。二、細(xì)胞復(fù)蘇的小Tips1.為防止凍存管在水浴鍋中升溫時(shí)突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。2.從液氮罐里拿出細(xì)胞不必急于放入水浴鍋中，因?yàn)榧?xì)胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個(gè)過程對細(xì)胞是沒有損害的，我們有足夠的時(shí)間處理。但是，一...

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免疫組化（IHC）SP法，原來如此簡單！

免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理-抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內(nèi)源性過氧化物酶→抗原修復(fù)→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應(yīng)→DAB顯色→蘇木素復(fù)染→常規(guī)脫水→透明→封片2、免疫組化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)①脫蠟和水化②抗原修復(fù)③滅活內(nèi)源性過氧化物酶和...

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WB-考馬斯亮藍(lán)染色法

一、考馬斯亮藍(lán)結(jié)構(gòu)考馬斯亮藍(lán)R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學(xué)形式，結(jié)構(gòu)上R-250比G-250少了2個(gè)甲基。二、蛋白質(zhì)染料要求用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復(fù)合物是電泳后檢測常用的方法。選用染料通常應(yīng)考慮以下要求：1.必須與大分子結(jié)合以形成一個(gè)不溶性的，有色的，緊密的復(fù)合物，但不結(jié)合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會(huì)影響蛋白帶的辨別和定量掃描。2.染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。3.選用高吸光系數(shù)的...

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細(xì)胞凍存的小Tips

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細(xì)胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癜凑沼?jì)劃有效地進(jìn)行。掌握好細(xì)胞凍存的小Tips，有助您做好細(xì)胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞凍存的基本原則細(xì)胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細(xì)胞在超低溫環(huán)境中緩慢進(jìn)入“冬眠”狀態(tài)，暫時(shí)停止其代謝活動(dòng)。目的是保存細(xì)胞樣本，方便復(fù)蘇。二、細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)1.溫度控制不穩(wěn)定可能導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護(hù)劑，保護(hù)細(xì)胞。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍...

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